生物技术系列生物技术综合实验（李玉林） 下载 网盘 kindle mobi 115盘 pdf pdb rtf

本书是高职高专“十一五”规划教材★生物技术系列之一。本书共分为四部分。部分为基因工程技术，重点介绍外源基因在大肠杆菌中的克隆与表达，由9个实验组成。第二部分是生物大分子的分离纯化及活性检测，包括大肠杆菌中表达的外源蛋白的分离纯化与检测（7个实验）、动物血中超氧化物歧化酶提取、纯化与活性鉴定（5个实验）两章。第三部分是细胞工程及检测技术，分为鸡胚成纤维细胞培养技术（9个实验）、卵清蛋白多克隆抗体的制备与检测（6个实验）、原生质体的分离、融合与杂交细胞的筛选（7个实验）三章。第四部分是发酵工程与酶工程，分为谷氨酸发酵生产技术（9个实验）、实验室啤酒发酵技术（13个实验）、淀粉酶的发酵生产（9个实验）三章。各学校可根据条件和培养方向选用。

本书可供高职高专生物技术类各专业学生使用，也可作为相关领域技术人员的参考书。

篇　基因工程技术

　章　外源基因在大肠杆菌中的克隆与表达

　　实验一　大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存

　　实验二　大肠杆菌基因组DNA的提取

　　实验三　PCR扩增制备目的基因

　　实验四　质粒DNA提取

　　实验五　质粒DNA和目的基因的酶切和连接

　　实验六　琼脂糖凝胶电泳检测、回收目的基因

　　实验七　感受态细胞的制备和重组子转化

　　实验八　转化克隆的筛选和鉴定

　　实验九　外源基因的诱导表达

第二篇　生物大分子的分离纯化及活性检测

　第二章　大肠杆菌中表达的外源蛋白的分离纯化与检测

　　实验一　小量表达及细胞破碎

　　实验二　表达蛋白的SDS?PAGE电泳分析

　　实验三　包涵体的洗涤、溶解、复性

　　实验四　从包涵体中纯化表达蛋白

　　实验五　固化Ni＋吸收光谱纯化his?tag表达蛋白

　　实验六　Western blotting免疫印迹检测表达蛋白

　　实验七　碱性磷酸酶（AP）米氏常数（Km）的测定

　第三章　动物血中超氧化物歧化酶的提取、纯化与活性鉴定

　　实验一　原材料的预处理

　　实验二　超氧化物歧化酶的活性测定

　　实验三　粗酶液的制备

　　实验四　金属螯合色谱分离纯化超氧化物歧化酶

　　实验五　离子交换色谱纯化超氧化物歧化酶　

第三篇　细胞工程及检测技术

　第四章　鸡胚成纤维细胞培养技术

　　实验一　实验器材的清洗

　　实验二　实验器材的包装和消毒

　　实验三　培养用液的配制和无菌处理

　　实验四　鸡胚成纤维细胞的原代细胞培养

　　实验五　细胞克隆和纯化

　　实验六　细胞的传代培养

　　实验七　细胞生长曲线的测定

　　实验八　细胞的冻存和复苏

　　实验九　动物细胞融合

　第五章　卵清蛋白多克隆抗体的制备与检测

　　实验一　实验动物的抓取、固定和注射方法

　　实验二　实验动物的处死与取血方法

　　实验三　实验动物的免疫方法

　　实验四　抗血清的制备

　　实验五　双向琼脂扩散实验检测抗体效价

　　实验六　间接ELISA法检测抗体

　第六章　植物原生质体的分离、融合与杂交细胞的筛选

　　实验一　培养基母液的配制

　　实验二　培养基的配制与灭菌

　　实验三　愈伤组织的诱导与培养

　　实验四　原生质体的制备

　　实验五　原生质体的活力测定

　　实验六　原生质体的融合

　　实验七　杂交细胞的筛选

第四篇　发酵工程与酶工程

　第七章　谷氨酸发酵生产技术

　　实验一　谷氨酸菌种的制备

　　实验二　噬菌体的检测

　　实验三　大肠杆菌谷氨酸脱羧酶酶粉的制备

　　实验四　发酵过程中还原糖的测定

　　实验五　发酵过程中谷氨酸含量的测定

　　实验六　谷氨酸发酵液的除菌体

　　实验七　谷氨酸的离子交换回收

　　实验八　谷氨酸的等电回收及精制

　　实验九　谷氨酸钠质量控制及分析

　第八章　实验室啤酒发酵技术

　　实验一　啤酒酵母的纯种分离

　　实验二　啤酒酵母的计数

　　实验三　啤酒酵母的质量检查

　　实验四　啤酒酵母的扩大培养

　　实验五　麦芽汁的制备

　　实验六　麦芽汁糖度的测定

　　实验七　啤酒主发酵

　　实验八　总还原糖含量的测定

　　实验九　α?氨基氮含量的测定

　　实验十　酸度和pH的测定

　　实验十一　酒精度的测定及原麦芽汁浓度的计算

　　实验十二　色度和苦味物质含量的测定

　　实验十三　二氧化碳含量的测定

　第九章　淀粉酶的发酵生产

　　实验一　淀粉酶产生菌的分离、筛选与鉴定

　　实验二　发酵条件优化及酶学性质研究

　　实验三　淀粉酶产生菌的改良

　　实验四　淀粉酶的发酵生产

　　实验五　淀粉酶活力的测定

　　实验六　盐析处理和透析

　　实验七　离子交换剂的色谱处理

　　实验八　浓缩和冷冻干燥

　　实验九　淀粉酶的包埋处理及热稳定性测定

参考文献

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章 外源基因在大肠杆菌中的克隆与表达

大肠杆菌（F,scherichia coli）是一种杆状细菌，其染色体呈环状，约4．6×106个碱基对，含有4288个基因。大肠杆菌对生长条件要求不高，在仅含葡萄糖等碳水化合物（提供碳源和能量）的培养基中就能生长，是分子遗传学实验、基因工程操作中广泛采用的一种受体菌，它的遗传背景研究得比较详细，常用做寄主进行基因扩增及外源基因的表达。基因工程操作的基本过程包括限制性内切酶酶切、目的基因与载体连接、重组质粒的转化和扩增及重组子的筛选等。

　　实验一　大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存

一、实验目的

掌握大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存方法。

二、实验原理

大肠杆菌是一种杆状细菌，其染色体呈环状，约4．6×106个碱基对。除本身的核染色体外，往往还含有质粒（plasmid）DNA，这是一种双链闭合环状的DNA分子，大小在1～200kb左右。通常质粒DNA带有利于细菌在某一特定环境下生存的酶的基因，而使寄主菌具有以下一些表现型：①对抗生素的抗性；②产生抗生素；③降解有机复合物；④产生大肠杆菌素；⑤产生内毒素；⑥产生限制修饰酶。

pUC19质粒上带有一个与大肠杆菌抗氨苄青霉素（ampecillin）有关的基因（ampr），它能编码一种卢一内酰胺酶，这种酶降解氨苄青霉素，从而消除了氨苄青霉素对细胞壁形成的抑制作用，含这种质粒的细菌能在含氨苄青霉素的培养基上存活，不含该质粒的细菌则不能存活。

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